核准日期：2007年1月29日
唐氏综合征产前筛查系统
贝喜
Downs Syndrome Screening System
Tang Shi Zong He Zheng Chan Qian Shai Cha Xi Tong
【适用仪器】
1.200μl及1000μl单通道可调移液器，配套一次性吸管尖头；
2.200μl 8通道可调移液器，配套一次性吸管尖头；
3.蒸馏水；
4.玻璃管和试剂瓶（用于混合显色液A和显色液B及配制清洗液）；
5.吸水纸或纸巾；
6.酶标仪；（含450nm滤光片）
7.电脑。（CPU主频要求高于500，内存高于128M）
【样本要求】
抽取孕中期（14~20周）孕妇外周血2ml（孕周以B超或末次月经法计算），置一次性采血管内，室温静置1-2小时后2000转/分离心15分钟，吸取血清。若不能及时检测，血清标本应低温冻存，检测时应将标本融化后混合均匀，并避免反复冻融。血清标本在4℃冰箱只能存放一个星期。已稀释的血清不宜存放。所有标本均看作有潜在感染性的物品，操作和保存时按国家标准执行。
【试验方法】
一、试剂准备
1、测前使所有试剂达到室温（18~25℃，下同）。
2、将30ml浓缩清洗液用870ml蒸馏水做1：30倍稀释，摇匀备用，作为清洗液。
二、样本AFP浓度的测定
1、AFP标准品的稀释
（1）向AFP标准品F(40IU/ml)瓶中加入0.6ml稀释液，混匀；
（2）向AFP标准品B、C、D、E管中分别加入300μ1稀释液；
（3）从AFP标准品 F瓶中取300μ1混匀的液体加到AFP标准品E管中，混匀；
（4）从AFP标准品E瓶中取300μ1混匀的液体加到AFP标准品D管中，混匀；
（5）依此类推，AFP标准品C、B的制备同上，AFP标准品A即为稀释液；
（6）AFP标准品A、B、C、D、E、F的浓度依次为0、2.5、5、10、20、40IU/ml，标准品稀释后需在短期内用完。
2、质控品的稀释
AFP质控品1和2：分别加入0.6ml稀释液，混匀；
3、加样
（1）根据AFP标准品、质控品以及待测标本标记抗体包被板(切记不要与hCG抗体包被板搞混!)；
（2）AFP的6个标准品及2个质控品均直接取100μ1加入相应孔内；
（3）在待测标本的孔中先分别加入80μ1稀释液；
（4）直接取20μ1待测标本加到已加入80μ1稀释液的AFP抗体包被板中(AFP检测最终稀释度为1：5)；
（5）将加好样的酶标板水平轻轻晃动以混匀样本，然后盖上封板膜，置于37℃孵育1小时。
4、洗板
甩去孔内液体，用稀释好的清洗液加满各孔，略静置一下，甩去板内液体，再加入清洗液，重复操作共5次，拍干。
5、酶标抗体反应
（1）将AFP酶标抗体100μ1/孔加入相应的孔中，注意不要将AFP和hCG搞混；
（2）盖上封板膜，置于37℃孵育1小时；
（3）重复洗板操作。
6、显色
（1）每孔先加入50μ1显色液A，再分别加入50μ1显色液B，水平轻轻晃动；
（2）室温避光静置30分钟；
（3）每孔加入200μ1终止液，终止反应。
7、比色
用酶标仪于450nm波长下读取光密度值(OD值)。
三、 样本hCG浓度的测定
1、hCG标准品的稀释
（1）向hCG标准品F(200mIU/ml)瓶中加入0.6ml稀释液，混匀；
（2）向hCG标准品B、C、D、E管中分别加入300μ1稀释液；
（3）从hCG标准品 F瓶中取300μ1混匀的液体加到hCG标准品E管中，混匀；
（4）从hCG标准品E瓶中取300μ1混匀的液体加到hCG标准品D管中，混匀；
（5）依此类推，hCG标准品C、B的制备同上，hCG标准品A即为稀释液；
（6）hCG标准品A、B、C、D、E、F的浓度依次为0、12.5、25、50、100、200mIU/ml，标准品稀释后需在短期内用完。
2、质控品的稀释
hCG质控品1和2：分别加入0.6ml稀释液，混匀。
3、待测标本的稀释(1：250稀释)
（1）在血清稀释板上稀释，每一份标本需要用两孔；
（2）先做1：25倍稀释：在第一孔中加入120μ1稀释液，再加入5μ1待测血清，反复吹打混匀；
（3）再做1：10倍稀释：在第二孔中加入45μ1稀释液，再从第一孔中取5μ1混合好的样本加入其中，反复吹打混匀。
4、加样
（1）根据hCG的标准品、质控品以及待测标本标记抗体包被板(切记不要与AFP抗体包被板搞混!)；
（2）hCG的6个标准品及2个质控品均直接取100μ1加入相应孔内；
（3）在待测标本的孔中先分别加入80μ1稀释液；
（4） 从血清稀释板里已经做了1：250倍稀释的样本中取20μ1加到已加入80μ1稀释液的hCG抗体包被板中(hCG检测最终稀释度为1：1250)；
（5）将加好样的酶标板水平轻轻晃动以混匀样本，然后盖上封板膜，置于37℃孵育1小时。
5、洗板
甩去孔内液体，用稀释好的清洗液加满各孔，略静置一下，甩去板内液体，再加入清洗液，重复操作共5次，拍干。
6、酶标抗体反应
（1）将hCG酶标抗体100μ1/孔加入相应的孔中，注意不要将AFP和hCG搞混；
（2）盖上封板膜，置于37℃孵育1小时；
（3）重复洗板操作。
7、显色
（1）每孔先加入50μ1显色液A，再分别加入50μ1显色液B，水平轻轻晃动；
（2）室温避光静置30分钟；
（3）每孔加入200μ1终止液，终止反应。
8、比色
用酶标仪于450nm波长下读取光密度值(OD值)。
四、质量控制
1.若样本浓度超过标准曲线范围，可将标本进一步稀释后再做检测；
2.若样本的OD值低于标准品A的OD值，可相应减少稀释的倍数再做检测；
3.AFP质控品1应为2.5-7.5IU/ml，AFP质控品2应为30-38IU/ml，标准曲线相关系数（r）应≥0.95，否则实验失败，应重做。
4.hCG质控品1应为36-66mIU/ml，hCG质控品2应为121-177mIU/ml，标准曲线相关系数（r）应≥0.95，否则实验失败，应重做。
五、结果分析
1.将AFP浓度测定的标准品、质控品及标本的OD值输入配套的数据分析软件；
2.将hCG浓度测定的标准品、质控品及标本的OD值输入配套的数据分析软件；
3.将标本对应的孕妇的年龄（单位：岁）和孕周（单位：周）输入配套的数据分析软件；
4.通过数据分析软件，计算唐氏综合征或胎儿其他染色体异常的危险系数；
5.危险系数的临界值为1/275：
1）当危险系数大于临界值，建议做产前诊断，如抽取羊水，做羊水细胞培养染色体核型分析等；或直接人工流产，终止妊娠；
2）当危险系数小于临界值，则胎儿为唐氏综合征的危险较小，可继续妊娠。
【产品性能指标】
1、最低检出量
AFP：2.0 IU/ml
hCG：15 mIU/ml
2、测定范围
AFP：0-40 IU/ml
hCG：0-200 mIU/ml
3、测定精密度
AFP：≤12%
hCG：≤12%
4、本系统危险系数临界值为1/275，筛查假阳性率为5%。
本品有两个规格：
1）48人份/盒；
2）96人份/盒。
1.请详细阅读本品说明书；
2.每次检测必须同时做AFP和hCG的标准曲线及质控品，不能使用以前做过的标准曲线；
3.如果一个试剂盒一次使用不完，且几次检测时间间隔较长，建议将剩余的标准品及质控品置于低温(0℃以下)冰箱冷冻保存，下一次使用前取出，融化后混匀再使用(酶标抗体不宜低温冷冻)；
4.建议一个试剂盒(48人份)最好一次使用完，若条件不允许也不要分两次以上使用，这样不但标准品及质控品不够用，而且会造成浪费(每次都要有8孔来作标准品及质控品)，同时标准品及质控品的反复多次冻融会对检测结果造成影响；
5.如果条件允许，建议将标准品和质控品做双孔，结果以两孔的平均值计算；
6.一次未用完之包被板条应密封保存，贮藏及应用时不要将试剂暴露于强热、光下；
7.本试剂盒仅供体外诊断用，一个盒应作为整体应用，不要将不同批号的试剂混合用，并请在有效期内使用；
8.含大量脂质、严重黄疸及溶血或加热灭活之标本均可能影响检测结果；
9.建议按《产前诊断技术管理办法》的有关规定，使用本品。
2~8℃，避光保存。
6个月
上海复旦张江生物医药股份有限公司